Técnica de hibridación para Neoplasias mieloides

 Leucemia mieloide crónica

En el diagnóstico de la leucemia mieloide crónica (LMC), se utiliza la técnica de hibridación in situ fluorescente (FISH) como una herramienta eficaz para detectar la translocación t(9;22)(q34;q11), responsable de la formación del gen de fusión BCR::ABL1, característico de esta neoplasia. Esta técnica emplea sondas específicas para los genes BCR y ABL1, permitiendo la identificación del cromosoma Filadelfia tanto en médula ósea como en sangre periférica. FISH es útil en casos donde el cariotipo no detecta alteraciones o en pacientes con variantes moleculares. Además, se complementa con estudios de PCR para cuantificar la expresión del gen BCR::ABL1, lo cual es fundamental para el seguimiento y evaluación de la respuesta al tratamiento con inhibidores de tirosina-quinasa (1).

Tabla: Categorías de respuesta importantes en la leucemia mieloide crónica

Obtenido de: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/ajh.26642

Video obtenido de: https://www.youtube.com/watch?v=NB_gt1TY-CA

Prueba PCR para Toxoplamosis congénita

La toxoplasmosis congénita representa un importante problema de salud pública en varios países, y su diagnóstico presenta múltiples desafíos. Entre las herramientas más eficaces para su confirmación destaca la Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real (qPCR), una técnica molecular que permite detectar el ADN del Toxoplasma gondii, agente causal de la enfermedad.

• Tema: PCR en tiempo real para el diagnóstico de la toxoplasmosis congénita
• Objetivo: Evaluar el uso de la PCR en tiempo real como herramienta diagnóstica para detectar Toxoplasma gondii en muestras biológicas.
• Tipo de muestras biológicas: El estudio evaluó diferentes tipos de muestras provenientes de mujeres embarazadas y sus recién nacidos, como líquido amniótico, sangre periférica materna y del RN y placenta.
• Extracción del ácido nucléico: Se extrajo ADN genómico a partir de las diferentes muestras biológicas utilizando el kit QIAamp DNA Blood Mini Kit. La concentración del ADN fue medida mediante espectrofotometría UV a 260 nm con el equipo Nanodrop 1000.
• Tipo de PCR:  PCR en tiempo real (qPCR) con el sistema TaqMan, no es una PCR patentada, ya que emplea métodos comerciales disponibles, pero sí utiliza una sonda específica fluorescente que incrementa la sensibilidad del análisis.
• Genes amplificados: El blanco molecular fue la secuencia REP-529 del T. gondii, una región altamente repetitiva con 529 pb, lo que favorece su detección incluso en muestras con baja carga parasitaria.
• Pasos de la PCR:

1. Extracción del ADN: Se extrajo ADN genómico con el QIAGEN.
2. Cuantificación del ADN: Espectrofotómetro UV (Nanodrop 1000) a 260 nm.
3. Preparación de la reacción: Iniciadores específicos (primers 270F y 318R) y sonda TaqMan para la secuencia REP-529. Reacción en un volumen final de 25 μL.
4. Condiciones del termociclador: 2 min a 50 °C, 10 min a 95 °C, 40 ciclos de: 15 s a 95 °C, 1 min a 60 °C.

• Tipo de resultados: Los resultados fueron cuantitativos, expresados como Unidades Internacionales (UI) o copias por mililitro (copias/mL). Se estableció una curva estándar con diluciones seriadas de ADN de T. gondii, de 10⁶ a 1 parásito/mL. La eficiencia del PCR fue superior al 92% y el coeficiente de correlación fue ≥0.99. Una muestra fue clasificada como indetectable si el umbral de ciclo (CT) era >38. Se usó amplificación del gen humano RNaseP como control interno para verificar calidad del ADN y ausencia de inhibidores.
• Muestra más efectiva: Líquido amniótico 

Tabla: Descripción de casos de toxoplasmosis congénita y aquellos con muestra de PCR positiva.

Obtenido de: https://www.scielo.br/j/bjid/a/jgszkpKNqJt6dVdrS8F55pP/?lang=en

Técnica de Secuenciación para Infarto agudo de miocardio

Estudio del transcriptoma de todo el genoma mediante secuenciación profunda de ARN para el infarto de miocardio y la calcificación de la arteria coronaria

Este estudio utilizó secuenciación profunda de ARN en sangre para identificar genes relacionados con infarto agudo de miocardio (IAM) temprano y calcificación coronaria (CAC). Se encontraron 68 genes codificantes y 2 lincRNAs diferencialmente expresados en casos de IAM, y solo 3 genes codificantes y 1 lincRNA en CAC. Uno de los genes más importantes fue APOD, involucrado en el metabolismo de lipoproteínas y que se encontró más bajo en ambos grupos, este gen podría ser clave en el desarrollo de enfermedades del corazón. También se vieron alteraciones en genes relacionados con el sistema inmune y el metabolismo de las grasas (1).

Figura 1: Diagrama de flujo de mapeo de secuenciación, cuantificación y análisis de expresión de datos de RNA-Seq para identificar firmas de expresión codificantes y no codificantes asociadas con MI y CAC.

Obtenido de: https://link.springer.com/article/10.1186/s12920-020-00838-2/figures/1

Alteración de la Epigenética en la Neumonía

Susceptibilidad epigenética a infecciones virales respiratorias graves y sus implicaciones terapéuticas

Este artículo explica cómo los virus respiratorios, como el SARS-CoV-2 y el H5N1 pueden causar neumonía grave al alterar mecanismos epigenéticos del cuerpo, como la metilación del ADN y los cambios en histonas. Estas alteraciones afectan genes importantes como ACE2, PCBP2, SMAD9L, CFHR1 y DDX58, que están relacionados con la inflamación y la defensa antiviral. Estos cambios pueden empeorar la inflamación y el daño pulmonar. También se analizan fármacos como tocilizumab, estatinas, curcumina y metformina, que podrían ayudar a controlar estas alteraciones y mejorar el tratamiento (1).

Figura 1: Alteraciones epigenéticas virus-huésped

Obtenido de: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0007091220305638

Alteraciones de la traducción en el COVID-19

La proteína viral NSP1 actúa como un guardián del ribosoma para detener la traducción del huésped y fomentar la traducción del SARS-CoV-2

Este estudio explica cómo el virus SARS-CoV-2 logra apagar la producción de proteínas en nuestras células usando una proteína llamada NSP1. Sin embargo, el virus se las ingenia para seguir fabricando sus propias proteínas gracias a una estructura especial en su ARN llamada SL1. Esta estructura permite que el virus esquive el bloqueo que NSP1 causa en el ribosoma. Es decir, NSP1 actúa como un guardián que impide que las células trabajen, pero deja pasar solo al virus. Por eso, el SL1 podría ser un buen objetivo para nuevos tratamientos contra el COVID-19 (1).

Figura 1. Modelo para NSP1 actuando como un guardián para asegurar la evasión de NSP1 por SARS-CoV-2 5′UTR

Obtenido de: https://rnajournal.cshlp.org/content/27/3/253/F6.expansion.html

Alteraciones de la transcripción en la Colelitiasis

Cambios en la metilación del ADN del hígado durante la formación de cálculos biliares

Este artículo analiza cómo cambian los patrones de metilación del ADN en el hígado durante la formación de cálculos biliares. Se encontró que muchos genes mostraron cambios en su metilación y expresión, entre los genes destacados están CYP7A1, CYP8B1, ABCG5, ABCC4, SLC51B y APOC2, que podrían estar relacionados con la formación de cálculos. El estudio utilizó ratones alimentados con una dieta especial para inducir cálculos y se comparó su ADN con ratones sanos con una dieta normal. En conclusión, la metilación del ADN podría juegan un papel importante y los investigadores sugieren que estos cambios epigenéticos podrían alterar el equilibrio de lípidos en la bilis, favoreciendo la formación de cálculos (1). 

Obtenido de: https://www.tandfonline.com/doi/figure/10.2217/epi-2023-0391?scroll=top&needAccess=true

Alteraciones de la genómica en la Insuficiencia Cardíaca

 Papel del epigenoma en la insuficiencia cardíaca

Este artículo revisa cómo las modificaciones epigenéticas, como la metilación del ADN y la acetilación de histonas, están implicadas en la insuficiencia cardíaca. Estas alteraciones afectan la estructura de la cromatina y la expresión génica en cardiomiocitos y fibroblastos, contribuyendo a la reactivación de genes fetales y al desarrollo de hipertrofia y fibrosis. Se detallan enzimas involucradas como DNMTs, TET, HDACs y HATs, y se analizan terapias potenciales que buscan modular estos mecanismos epigenéticos. Se destaca la importancia de seguir investigando para desarrollar tratamientos eficaces para la insuficiencia cardíaca (1).

Obtenido de: https://journals.physiology.org/doi/full/10.1152/physrev.00037.2019