Prueba PCR para Toxoplamosis congénita

La toxoplasmosis congénita representa un importante problema de salud pública en varios países, y su diagnóstico presenta múltiples desafíos. Entre las herramientas más eficaces para su confirmación destaca la Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real (qPCR), una técnica molecular que permite detectar el ADN del Toxoplasma gondii, agente causal de la enfermedad.

• Tema: PCR en tiempo real para el diagnóstico de la toxoplasmosis congénita
• Objetivo: Evaluar el uso de la PCR en tiempo real como herramienta diagnóstica para detectar Toxoplasma gondii en muestras biológicas.
• Tipo de muestras biológicas: El estudio evaluó diferentes tipos de muestras provenientes de mujeres embarazadas y sus recién nacidos, como líquido amniótico, sangre periférica materna y del RN y placenta.
• Extracción del ácido nucléico: Se extrajo ADN genómico a partir de las diferentes muestras biológicas utilizando el kit QIAamp DNA Blood Mini Kit. La concentración del ADN fue medida mediante espectrofotometría UV a 260 nm con el equipo Nanodrop 1000.
• Tipo de PCR:  PCR en tiempo real (qPCR) con el sistema TaqMan, no es una PCR patentada, ya que emplea métodos comerciales disponibles, pero sí utiliza una sonda específica fluorescente que incrementa la sensibilidad del análisis.
• Genes amplificados: El blanco molecular fue la secuencia REP-529 del T. gondii, una región altamente repetitiva con 529 pb, lo que favorece su detección incluso en muestras con baja carga parasitaria.
• Pasos de la PCR:

1. Extracción del ADN: Se extrajo ADN genómico con el QIAGEN.
2. Cuantificación del ADN: Espectrofotómetro UV (Nanodrop 1000) a 260 nm.
3. Preparación de la reacción: Iniciadores específicos (primers 270F y 318R) y sonda TaqMan para la secuencia REP-529. Reacción en un volumen final de 25 μL.
4. Condiciones del termociclador: 2 min a 50 °C, 10 min a 95 °C, 40 ciclos de: 15 s a 95 °C, 1 min a 60 °C.

• Tipo de resultados: Los resultados fueron cuantitativos, expresados como Unidades Internacionales (UI) o copias por mililitro (copias/mL). Se estableció una curva estándar con diluciones seriadas de ADN de T. gondii, de 10⁶ a 1 parásito/mL. La eficiencia del PCR fue superior al 92% y el coeficiente de correlación fue ≥0.99. Una muestra fue clasificada como indetectable si el umbral de ciclo (CT) era >38. Se usó amplificación del gen humano RNaseP como control interno para verificar calidad del ADN y ausencia de inhibidores.
• Muestra más efectiva: Líquido amniótico 

Tabla: Descripción de casos de toxoplasmosis congénita y aquellos con muestra de PCR positiva.

Obtenido de: https://www.scielo.br/j/bjid/a/jgszkpKNqJt6dVdrS8F55pP/?lang=en

Referencias

1.      Balzano B, Henrique L, Elyzabeth Avvad Portari, Ramos CP, Danielle Nascimento Rocha, José Paulo Pereira, et al. Real-time PCR in the diagnosis of congenital toxoplasmosis. The Brazilian Journal of Infectious Diseases. 2023 Sep 1;27(5):102804–4. Disponible en: https://www.scielo.br/j/bjid/a/jgszkpKNqJt6dVdrS8F55pP/?lang=en