ADN recombinante artificial y en la naturaleza

 ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

¿Generado aleatoriamente y seleccionado funcionalmente? La naturaleza de la recombinación de enterovirus

Este estudio analiza la recombinación genética en enterovirus como un mecanismo evolutivo natural, sin intervención humana. Utilizando un sistema in vitro (CRE-REP) y coinfección con poliovirus tipo 1 y 3, los autores buscaron entender si la identidad de secuencia o la estructura del ARN determinan los sitios de recombinación. Encontraron que estos eventos ocurren de forma aleatoria, y que la selección posterior favorece solo los genomas funcionales. A través de secuenciación masiva se identificaron recombinantes precisos e imprecisos distribuidos por todo el genoma. El crossing over en estos virus es un proceso replicativo espontáneo seguido de una estricta selección por viabilidad (1). 

Figura 1: Representación esquemática de los ensayos CRE-REP

Obtenido de: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9144335/

 ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL

IL-15 citotópica (cito-) como nueva inmunoterapia para el cáncer de próstata: producción recombinante en Escherichia coli y purificación

• Tema: IL-15 citotópica (cito-) como nueva inmunoterapia para el cáncer de próstata

• Objetivo: Optimizar la producción y purificación de IL-15 humana modificada para facilitar su modificación citotópica y evaluar su eficacia como tratamiento contra tumores de próstata en modelos murinos

• Gen o secuencia a clonar: Gen humano IL-15 modificado, que codifica los aminoácidos 49–162

• Enzimas de restricción: NdeI y HindIII

• Enzimas ligasa: No se menciona el uso explícito de una enzima ligasa en el artículo, pero en un protocolo normal de clonación molecular, T4 DNA ligasa sería la utilizada

• Vector: pET30a

• Célula receptora: Escherichia coli BL21 star (DE3) - Procariota

• Mecanismo de transferencia o inserción del gen: Transformación en estrella E. coli BL21 mediante choque térmico

• Métodos de identificación de clones: Los clones positivos se seleccionaron mediante resistencia a kanamicina y posteriormente se cultivaron a 37 °C con agitación en medio terrific broth. También se realizó SDS-PAGE para verificar tamaño y pureza de la proteína (~18 kDa), western blot con anticuerpos anti-IL-15 y anti-PTL3146 y ensayo funcional de proliferación celular con células CTLL-2, confirmando la actividad biológica del IL-15 (2).

Figura 2: Representación esquemática de la IL-15 humana modificada, el péptido citotópico PTL3146 y la IL-15 citotópicamente modificada final (cito-IL-15).

Obtenido de: https://www.frontiersin.org/journals/molecular-biosciences/articles/10.3389/fmolb.2021.755764/full

Referencias: 

1. Alnaji FG, Bentley K, Pearson A, Woodman A, Moore J, Fox H, et al. Generated Randomly and Selected Functionally? The Nature of Enterovirus Recombination. Viruses [Internet]. 2022 Apr 28 [cited 2025 Jul 13];14(5):916–6. Available from: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC9144335/
2. Esteves AM, Papaevangelou E, Smolarek D, Dasgupta P, Galustian C. Cytotopic (Cyto-) IL-15 as a New Immunotherapy for Prostate Cancer: Recombinant Production in Escherichia coli and Purification. Frontiers in Molecular Biosciences. 2021 Oct 27;8. Available from: https://www.frontiersin.org/journals/molecular-biosciences/articles/10.3389/fmolb.2021.755764/full